2001년에 설립된 ProMab Biotechnologies는 재조합 단백질, 항체 및 재조합된 세포주를 혁신적인 연구 및 진단 개발용으로 공급함과 동시에 글로벌 생명 의학 연구 커뮤니티를 위한 수탁 용역 서비스를 제공합니다. 특히, CAR-T/NK 세포 기술 분야에 초점을 맞추어 인간 건강을 개선하기 위해 노력하고 있습니다. 매우 특이적이고 강력한 단일 클론 항체를 생성한 20여년의 경험을 활용한 CAR-T/NK 개발 성공으로 세계 최초의 CAR-T CRO가 되었습니다.

Promab사는 다양한 표적 항원에 특이적인 CAR(키메라 항원 수용체)을 생성했으며, 이들 중 다수는 종양 세포에서 발현되었습니다. 이러한 표적 항원으로는 CD19, CD22, CD133, Her-2, EGFR 및 Mesothelin이 포함됩니다.

Promab 사는 Lentivirus를 사용하여 CAR을 T 세포에 형질도입하여 CAR-T 세포를 생성했습니다. Promab은 또한 CAR의 하위 집합에 대해 CAR-NK 세포 및 CAR- 대식세포(macrophage)를 생성했습니다. CAR-T 세포는 유세포 분석(CAR-T 빈도 및 표현형 결정), 실시간 및 end-point  세포 독성 분석, cytokine 생산 및 체크 포인트 단백질 상향 조절(checkpoint protein upregulation)을 포함한 여러 방법을 사용하여 검증됩니다.

음성 대조군(negative control)을 위해 Promab사는 scFv 도메인이 없지만 Beam-2 항체로 검출할 수 있는 CAR를 생성했습니다. 또한 또다른 음성 대조군으로 형질도입되지 않은 T세포를 제공합니다.

Promab사는 electroporation 및 viral transduction 방법을 사용하여 CAR-NK 세포를 생성합니다. 또한 CAR 하위 집합에 대해 CAR-T 세포와 CAR-대식세포를 생성했습니다. CAR-NK 세포는 flow cytometry(CAR-NK 빈도 및 표현형을 확인하구 위한 방법), 실시간 및 end-point 세포 독성 분석, cytokines 생산 및 체크 포인트 단백질 상향 조절(checkpoint protein upregulation)을 포함한 여러 방법을 사용하여 검증됩니다.

Figure 1. T cells can be isolated from PBMC cells. T cells can be activated with CD28/CD3 beads (Figure 1) and expanded >100 fold using CAR-T CELL EXPANSIONS MEDIUM (FBS, FETAL BOVINE SERUM) or human serum or used for flow cytometry or cytotoxicity assays (Figures 1, 2).