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TUBEs: Ubiquitin Affinity Matrix

유비퀴틴화된 단백질을 확인하기 위한 전통적인 방법은 과발현된 에피토프 태그가 붙은 유비퀴틴(overexpressed epitope-tagged ubiquitin)의 면역 침전이나 유비퀴틴 항체를 사용 합니다. 항체 기반 유비퀴틴 단백질 연구는 대규모 연구시 비용이 많이 들고, 또한 대부분의 공급 업체에서 판매하는 유비퀴틴 항체는 비선택적이며, 인공물로 이어집니다.

LifeSensors는 Tandem Ubiquitin Binding Entities (TUBE)를 사용하여 세포나 조직으로부터 폴리유비퀴틴화된 단백질을 특이적으로 분리하는 기술을 보유하고 있습니다.

TUBEs는 tandem ubiquitin binding domain(UBD)이며, 나노몰 범위의 Kd 값을 가지는 tetra-ubiquitin과 결합합니다. TUBEs는 또한 탈유비퀴틴화 및 프로테오좀 매개의 분해 활동을 차단하는데 필요한 억제제가 없음에도 불구하고 탈유비퀴틴화 및 프로테오좀 매개의 분해로부터 유비퀴틴화된 단백질을 보호하는 것을 입증하였습니다.

LifeSensors사의 폴리유비퀴틴화 된 단백질을 선택적으로 캡쳐하는 강력한 기술력으로 인해 유비퀴틴 커뮤니티가 변화하고 있습니다. 모든 유형의 풀리유비퀴틴 사슬(pan-TUBEs)에 결합하는 TUBEs의 개발 이외에도, K48이나 K63, linear (M1) polyubiquitylated proteins에 선택적으로 결합하는 사슬 선택적 TUBEs를 개발했습니다. 후자는 각각 K48 HF TUBEs, K63 TUBEs, M1 TUBEs로 판매되고 있습니다. 나노몰의 친화성을 가지는 pan-selective, chain-selective TUBEs를 활용하는 LifeSensors사는 TUBE 기술을 활용하는 다양한 분석기법 및 서비스를 개발했습니다.





LifeSensors assay에는 아래와 같은 것들이 있습니다.


▶ E3 ELISA assays : E3 ligase 활성을 high-throughput 방식으로 검출

▶ Tr-TRET E3 assays : E3 ligase활성을 저해하는 화합물을 검출하기 위한 형광 기반의 high-throughput system

▶ UbiTest : 세포내 전체 유비퀴틴화된 단백질을 TUBE 기반으로 침전시켜 분리합니다. 이 후 시료는 폴리 유비퀴틴 사슬을 제거하기 위해 Pan 선택적인 DUBs (deubiqutinase)를 처리합니다. 관찰하고자 하는 목적 단백질은 고유 분자량으로 식별되고 면역블롯팅으로 분석 및 정량화됩니다. UbiTest는 세포내 단백질의 유비퀴틴화 정도를 정량화하는데 사용할 수 있는 가장 민감한 방법입니다.

▶ UbiQuant : PROTACs, E3 ligase 저해제들, DUB 저해제들 그리고 proteasome 저해제와 같은 화합물이 세포내 단백질에 미치는 영향을 모니터링하는 수단으로 세포나 조직 lysate에서 총 유비퀴틴(poly+mono) 농도를 측정하는 가장 민감하고 정확한 방법입니다.

▶ UbiQuant S ELISA and ALphaLISA : 세포내 기질의 유비퀴틴화 패턴에 대한 다양한 처리 효과를 모니터링하기 위해 기질 유비퀴틴화를 정확하게 측정할 수 있습니다.

▶ UbiQuant Ultra : UbiQuant 분석의 최신 분석법으로 높은 친화력을 가지는 TUBEs(tandem ubiquitin binding entities)로 코팅된 플레이트가 들어 있어, POI (protein of interest)의 유비퀴틴화된 부분이 캡쳐되고 정량화 될 수 있도록 가능성을 높여 줍니다.


품목코드 품목명 규격명 이미지
UM101 TUBE 1 (GST) 1 mg
UM101 TUBE 1 (GST) 200 µg
UM102 TUBE 2 (GST) 1 mg
UM102 TUBE 2 (GST) 200 µg
UM107 K48 TUBE HF (GST) 50 µg
UM107 K48 TUBE HF (GST) 250 µg
UM201 TUBE 1 (His6) 200 µg
UM201 TUBE 1 (His6) 1 mg
UM202 TUBE 2 (His6) 200 µg
UM202 TUBE 2 (His6) 1 mg
UM206 M1 TUBE (His6) 50 µg
UM207 K48 TUBE HF (His6) 50 µg
UM207 K48 TUBE HF (His6) 250 µg
UM301 TUBE 1 (Biotin) 200 µg
UM302 TUBE 2 (Biotin) 200 µg
UM304 K63 TUBE (Biotin) 50 µg
UM306 M1 TUBE (Biotin) 50 µg
UM307 K48 TUBE HF (Biotin) 250 µg
UM307 K48 TUBE HF (Biotin) 50 µg
UM312 TUBE 2 (HRP) 50 µg
UM400 Control Agarose Beads (negative control) 400 µL
UM400M Control Magnetic Beads (negative control) 1 mL
UM401 TUBE 1 (Agarose) 1 mL
UM401M TUBE 1 (Magnetic Beads) 1 mL
UM402 TUBE 2 (Agarose) 1 mL
UM402M TUBE 2 (Magnetic Beads) 1 mL
UM404M K63 TUBE (Magnetic Beads) 1 mL
UM407M K48 TUBE HF (Magnetic Beads) 1 mL
UM502F TUBE 2 (Fluorescein) 50 µg
UM502T TUBE 2 (TAMRA) 50 µg
UM504F K63 TUBE (Fluorescein) 50 µg
UM507F K48 TUBE HF (Fluorescein) 50 µg
UM504T K63 TUBE (TAMRA) 50 µg
UM507T K48 TUBE HF (TAMRA) 50 µg
UM601 TUBE 1 (FLAG) 200 µg
UM601 TUBE 1 (FLAG) 1 mg
UM602 TUBE 2 (FLAG) 1 mg
UM602 TUBE 2 (FLAG) 200 µg
UM604 K63 TUBE (FLAG) 50 µg
UM606 M1 TUBE (FLAG) 50 µg
UM607 K48 TUBE HF (FLAG) 50 µg
UM607 K48 TUBE HF (FLAG) 250 µg